色譜常見問題回答

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問：用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在?如何解決?

　　答：關(guān)于漂移問題：

　　1溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定

　　2流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等

　　3柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長時(shí)間的平衡

　　關(guān)于快速變化問題

　　1流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定

　　2泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。

　　3流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合

　　問：色質(zhì)聯(lián)用中毛細(xì)柱的選擇應(yīng)注意什么問題?

　　答：1柱效要高

　　2熱穩(wěn)定性好

　　3化學(xué)惰性強(qiáng)

　　具體選擇應(yīng)注意

　　1柱極性。根據(jù)分析樣品選擇不同極性的柱子進(jìn)行分析

　　2柱子內(nèi)徑。內(nèi)徑大小決定柱容量

　　3液膜厚度。分析樣品溫度一不一樣，對(duì)膜厚有不同要求，溫度高液膜要厚，溫度低液膜要薄

　　4柱長度。柱越長，柱效越高，分離效果越好，但也存在吸附問題，柱子過長，分析時(shí)間長，因此要根據(jù)樣品考慮柱子長度

　　5外涂層(柱體)的選擇

　　6另外還有儀器型號(hào)、分析對(duì)象等因素

　　問：液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?

　　答：1篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

　　2存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子

　　問：從那些方面可以簡單判別毛細(xì)管柱子的熱穩(wěn)定性好壞?

　　答：1分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高溫運(yùn)行后，分配容量K不應(yīng)有明顯的下降，否則，說明柱子的熱穩(wěn)定性不好。

　　2理論塔板數(shù)n，熱穩(wěn)定性好的柱子經(jīng)受高溫后，理論塔板數(shù)應(yīng)基本保持恒定

　　3柱子的極性。熱穩(wěn)定性好的柱子，高溫前后極性變化不大，具體表現(xiàn)為保留指數(shù)I值沒有大的變化。

　　4噪聲。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后，噪聲不能增加.

　　5柱子的去活層，毛細(xì)管柱子涂固定液前內(nèi)部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質(zhì)量好的毛細(xì)管柱子高溫后，去活層不應(yīng)該變化，表現(xiàn)在對(duì)強(qiáng)極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。

　　問：為什么進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套會(huì)對(duì)色譜行為造成影響?

　　答：進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套主要有下列作用：

　　1提供一個(gè)溫度均勻的汽化室，防止局部過熱。

　　2玻璃的惰性不如不銹鋼好，減少了在汽化期間樣品分解的可能性。

　　3易于拆換清洗，以保持清潔的汽化室表面，一些痕量非揮發(fā)性組分會(huì)逐漸積累殘存于汽化室，高溫下會(huì)慢慢分解，使基流增加，噪聲增大，通過清洗玻璃襯套可以消除這種影響。

　　4可根據(jù)需要選擇管壁厚度及內(nèi)徑適宜的玻璃襯套，以改變汽化室的體積，而不用更換整個(gè)進(jìn)樣加熱塊。從以上幾個(gè)方面可以知道玻璃襯套對(duì)色譜行為造成影響的原因。

　　問：毛細(xì)管色譜分流進(jìn)樣時(shí)，非線性分流的主要原因是什么?

　　答：1進(jìn)樣器溫度太低，樣品汽化不完全，發(fā)生分級(jí)分流。

　　2進(jìn)樣器溫度太高，某些組分可能發(fā)生熱分解，也有的樣品可能發(fā)生催化分解，或樣品部分地被吸附在進(jìn)樣器內(nèi)表面上。

　　3在分流點(diǎn)以前樣品沒有混合均勻或混合不充分。

　　4系統(tǒng)的進(jìn)樣墊，柱接頭等地方漏氣。

　　問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

　　答：1樣品量不足：解決辦法為增加樣品量

　　2樣品未從柱子中流出：可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子

　　3樣品與檢測(cè)器不匹配：根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測(cè)器

　　4檢測(cè)器衰減太多：調(diào)整衰減即可。

　　5檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大：解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)

　　6檢測(cè)器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。

　　7檢測(cè)池中有氣泡：解決辦法為排氣。

　　8記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)：調(diào)整電壓范圍即可。

　　9流動(dòng)相流量不合適：調(diào)整流速即可。

　　10檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。

　　問：做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在?如何解決?

　　答：原因可能有：

　　1泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理;

　　2比例閥失效，更換比例閥即可。

　　3泵密封墊損壞，更換密封墊即可。

　　4溶劑中的氣泡，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法;

　　5系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可。

　　6梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。

　　問：做PGS/MS分析時(shí)，如何防止焦油狀污染物進(jìn)入毛細(xì)柱?

　　答：聚合物，尤其是一些含氮、硫及鹵素的高分子裂解時(shí)，常有焦油狀物質(zhì)產(chǎn)生。為防止這種焦油狀物質(zhì)進(jìn)入毛細(xì)柱造成污染而使柱性能下降，可采用保護(hù)預(yù)柱，即在裂解器與毛細(xì)柱之間接一填充預(yù)柱，通過控制預(yù)柱溫度而使焦油狀物質(zhì)滯留在預(yù)柱內(nèi)，預(yù)注可置于GC氣化室內(nèi)，這樣既容易控制溫度，又減少系統(tǒng)的死體積，當(dāng)然，預(yù)柱填料需經(jīng)常更換。

　　問：我最近更換了另一種牌號(hào)的ODS柱，雖然分離情況仍可以，但保留時(shí)間不能重現(xiàn)，為什么?

　　答：這是因?yàn)楸环治鑫锟赡芫哂行纬蓺浣〉哪芰Α１M管過去幾年來，填料的制造技術(shù)有了極大的提高，但不同的廠商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號(hào)的ODS柱上的相對(duì)保留時(shí)間就可能不同。在流動(dòng)相中加入少量競(jìng)爭物，如三乙基胺(TEA)，將會(huì)使硅醇基的成鍵能力飽和，從而保證不同牌號(hào)柱子上的相對(duì)保留時(shí)間具有較好的重現(xiàn)性。

　　問：我購買的HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過高，請(qǐng)問為什么?

　　答：柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。

　　1拆去保護(hù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查;

　　2把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。

　　3將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，(此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)性)。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查;

　　4更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne7315型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。

　　問：高溫毛細(xì)柱的使用壽命一般為多長?

　　答：毛細(xì)柱壽命除決定于柱子本身的性能外，在很大程度上取決于使用情況，比如使用溫度、樣品狀態(tài)，進(jìn)樣量等，如果在其使用溫度范圍內(nèi)，樣品干凈，色譜柱不被污染的情況下，柱子壽命一般在2—3年之間。

　　問：如毛細(xì)管柱被污染，柱效和分辨率降低，有何方法使它恢復(fù)?是否可通過老化來解決?

　　答：根據(jù)柱污染程度可采取不同的方法來解決，如果污染不嚴(yán)重，污染物沸點(diǎn)不是太高，可通過老化來解決，但老化溫度不可超過柱子的最高使用溫度，且一般要較長時(shí)間(8—30小時(shí))，如果污染較嚴(yán)重，或通過老化仍不能使柱性能恢復(fù)，那就必須采用溶劑清洗，通常是用5倍柱容積的溶劑(如正戊烷，二氯甲烷等)通過色譜柱。當(dāng)然，清洗溶劑用的越多，對(duì)柱性能的損壞越大，清洗完后，在通載氣老化一定時(shí)間，如果柱性能恢復(fù)，便可繼續(xù)使用。必須指出：只有交聯(lián)柱才能清洗，對(duì)于非交聯(lián)柱，清洗柱會(huì)徹底失效，因?yàn)楣潭ㄒ罕幌吹袅?，至于清洗用溶劑的選擇，可參考說明書。

　　問：BPX70毛細(xì)管柱是否可用于GC/MS分析?

　　答：完全可以，BPX70為極性柱，使用溫度范圍寬(25—260℃)，程序升溫可達(dá)290℃，流失低，適合于分析脂肪酸甲酯的各種位置和幾何異構(gòu)體，藥物異構(gòu)體，碳水化合物等。因BPX70為交聯(lián)住，故用于GC/MS很穩(wěn)定，污染后可清洗再生。

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