液相色譜儀的分離原理是利用待分離的各種物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相兩相中的分配系數(shù)、吸附能力、親和能力等的不同來進(jìn)行分離的。改善液相色譜的分離度主要有以下三個(gè)方面：

一、流動(dòng)相

1、流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的類型和比例會影響色譜分離的選擇性

對于反相色譜模式，常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙腈和四氫呋喃，可以通過改變流動(dòng)相中的有機(jī)相種類或調(diào)整其比例，來改變選擇性和分離度。

2、流動(dòng)相的pH值影響分離度

對于中性的化合物，流動(dòng)相pH值的改變不會對其選擇性有太大的影響，對于酸性化合物和堿性化合物(可解離的化合物)，影響較大。

3、可以通過添加緩沖鹽來調(diào)整流動(dòng)相的離子強(qiáng)度，來改善目標(biāo)化合物與固定相之間的保留。

二、固定相

固定相中鍵合相的類型、填料的孔徑、封端類型以及色譜柱的粒徑和尺寸都會影響色譜分離的結(jié)果。

其中最主要的因素是鍵合相的選擇，當(dāng)你采用C18固定相無法得到好的分離結(jié)果，可以考慮極性較強(qiáng)的C8固定相，或者選擇性與其有較大差異的苯基己基柱進(jìn)行嘗試，或者采用封端的色譜柱代替未封端的色譜柱。

三、硬件系統(tǒng)

對硬件系統(tǒng)的一些參數(shù)進(jìn)行調(diào)整，也可以在一定程度上改善色譜分離的結(jié)果。

比如較高的采樣速率；采用較小內(nèi)徑的管線和較小的流通池來減小擴(kuò)散體積和延遲體積減小色譜峰的展寬；或者通過提高色譜柱的柱溫來改善分離度。

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