一、液相色譜峰保留時間延長

1、流速降低

檢查并重新設(shè)置流速，檢查泵是否有氣泡，檢查泵密封墊是否滲漏，以及單向閥和其它系統(tǒng)滲漏。

2、流動相組成改變

檢查系統(tǒng)是否有漏液點(diǎn)，排除系統(tǒng)氣泡，補(bǔ)足溶劑瓶，確保梯度系統(tǒng)比例正確，預(yù)混合流動相進(jìn)行等梯度洗脫，流動相組成的問題。

在反相色譜中，保留因子k和流動相中有機(jī)相的比例是成指數(shù)關(guān)系的。通常有機(jī)相變化1%，保留時間會變化5%-15%，一般是10%。

pH變化0.1會導(dǎo)致保留時間變化10%，所以要準(zhǔn)確的測量pH，并且要校正好pH計(jì)，在反相色譜中隨著pH的增加，酸性化合物保留時間縮短，而堿性化合物延長。

離子對試劑的濃度會影響離子型化合物組分的保留時間。帶有和離子對試劑相反電荷的分析物的保留時間會縮短，帶同樣電荷的會延長。

正相色譜的保留時間對流動相中的極性成分非常敏感，任何情況下水都是一個麻煩，使用半飽和水的非極性溶劑比如正己烷和二氯甲烷來避免這個問題。

3、鍵合相流失

對于常用硅膠型色譜柱，要保持流動相pH2~8之間。對于極高pH（>10）或極低pH（<2）的工作，使用高穩(wěn)定性固定相，聚合物或高穩(wěn)定性固定相柱。

4、硅膠填料的活化位點(diǎn)

使用流動相改性劑;流動相中加競爭堿;固定相用更高覆蓋度的填充料。

5、溫度降低

控制柱溫，通常溫度每變化1℃保留時間變化1%-2%。一般情況下影響沒有那么大，顯然這種問題用柱溫箱就可以避免。

二、液相色譜峰保留時間縮短

1、色譜柱填料的活性位點(diǎn)

使用流動相改性劑，競爭堿（堿性化合物，如三乙胺）或增加緩沖液強(qiáng)度，使用高覆蓋率的柱填料。

2、流動相組成改變

檢查系統(tǒng)是否有漏液點(diǎn)；排除系統(tǒng)氣泡；補(bǔ)足溶劑瓶；確保梯度系統(tǒng)比例正確；預(yù)混合流動相進(jìn)行等梯度洗脫。

3、樣品過載

減少樣品量或使用較大內(nèi)徑或更長的色譜柱。

4、鍵合相或硅膠基流失

使用溫和pH的流動相；使用耐受高pH或低pH專用硅膠柱，聚合物柱或其它高/低pH柱。

5、 色譜柱老化

使用保護(hù)柱，或高穩(wěn)定性鍵合相聚合物、混合型或高穩(wěn)定性柱。

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