一、質量控制相關定義

質量控制：滿足質量要求的操作技術和活動。

質量保證：為了滿足實驗室質量要求 ，制定相應的計劃，實施證明（記錄）所進行的一系列的系統(tǒng)活動

外部質量控制：通過互相校準和/或檢驗對實驗室的操作和結果所進行的控制

內部質量控制：實驗室內部采取的以對比分析、跟蹤以及相關方法，對實驗室工作的連續(xù)性控制計劃。

質量手冊：是描述質量系統(tǒng)元素的文件或文件的集合。

二、實驗室要求

 按國家實驗室認可的概念，是指一個能夠承擔法律責任的實體。這里所指的是實驗室（微檢室）內建立的質量管理的保證體系。人員、房屋設備滿足檢測工作需要。

1、人員要求

實驗室人員的分類：管理人員、技術人員、技術支持人員等。

相應崗位的人員，應具備相應的技術能力，相應的技術能力證明（證書及證件）。

微生物檢驗室因有相應技術能力的人負責室內的技術工作。并設立質量監(jiān)督員。

2、房屋條件要求

房屋要求：具有適宜、足夠寬敞、通風有良好的照明。

房屋內墻面及地等應采用易于清潔的材料，保持房間清潔。

房間的設置，以其開展的工作內容加以分用，設立專用房間。

房間的大小還應根據(jù)從事實驗人員的進入數(shù)量上加以考慮。

3、環(huán)境設施要求

專用房間的溫濕度控制與記錄（樣品存放室）

特殊環(huán)境的微生物指標控制與記錄（無菌室等）

專用工作室的標準操作規(guī)程和定期的檢測校準程序。（潔凈室等）

特殊環(huán)境中的專用設施質量控制應符合有關要求（凈化工作臺）

三、設備控制和程序

1、微生物檢驗常用需監(jiān)控的設備和儀器

培養(yǎng)箱（生化培養(yǎng)箱或CO2培養(yǎng)箱等）、干燥箱、高壓滅菌鍋、凈化工作臺、pH計、冰箱（低溫冰箱或冷柜）溫度計、紫外燈、顯微鏡、離心機?、電子天平。

小計量容器

微生物測定儀器、微生物檢定儀器、空氣采樣器、酶標儀專用等。

2、具體設備控制

（1）高壓滅菌鍋的溫度控制

高壓滅菌鍋；生物指示菌法（常用）、化學變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計等方法進行檢測。

生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。

高壓滅菌鍋由專人按作業(yè)指導書操作，并做好每一次的作業(yè)記錄。

高壓滅菌鍋使用時，內置物品不能太多，單位體積內的內容物（每瓶內的培養(yǎng)基）不能太多。同時應注意內容物不同耐受溫度?？偟谋┞稌r間最好不要超過45min。

高壓滅菌鍋日常工作記錄應包含以下信息：高壓滅菌的材料、開始時間、壓力/溫度、取出時間、高壓滅菌膠帶的顏色變化（日常常用無菌培養(yǎng)代替）

高壓滅菌鍋溫度波動范圍：110，115和121±2℃。

高壓滅菌鍋校準周期一般在半年。

（2）干燥滅菌箱溫度控制

干燥滅菌箱日常工作記錄中應包括以下信息：開始的時間、到達滅菌溫度時的時間、取出的時間（或關閉時間）。

干燥滅菌箱的溫度校準；用參考溫度計進行溫度測試。

干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5 ℃或180 ±5 ℃。前者為滅菌2h，后者為30min。

干燥滅菌箱校準時間一般為一年。

（3）培養(yǎng)基配制用蒸餾水的控制

對于蒸餾水器來說：按設備說明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。

檢測要求：西歐標準為微生物檢驗用蒸餾水的特定電導率＜0.5ms/m；細菌數(shù)＜50cfu/ml。我們日常用的標準為＜10ms/m，未見有細菌指標。

檢測頻率：1次/每月。

蒸餾水定點供應，并做好相應的質量控制，記錄檢測結果。

（4）天平的管理

天平放置要求：無振動、無氣流影響及水平臺面上。

天平要有使用及運行檢查記錄。

天平作為計量儀器是列入國家強制檢定的范圍，一般1次/年進行檢定。

運行檢查頻率按運行計劃或按產品（天平生產廠家）給出的標準重量單位進行對照

（5）pH計

pH計使用前應用標準液進行校準。

緩沖液使用有效期：PH4.00 約1年

PH7.00 約6個月

pH9.00 約6個月

pH計的維護：電極外表的定期清洗；電極敏感性檢測及極性恢復。

（6）凈化工作臺的控制

水平流凈化工作臺工作區(qū)域，要求潔凈度為100級。空氣沉降30min，細菌數(shù)＜1個/皿。垂直流凈化工作臺，細菌數(shù)＜0.49個/皿.

凈化工作臺運行檢查頻次：1次/月主要是細菌沉降檢測。

凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進行粒子與細菌沉降檢測。

（7）紫外線燈的控制

檢測方法：儀器測試法和生物測試法。前者是通過專用儀器檢測紫外燈管發(fā)射的紫外光強度。國家消毒技術規(guī)范中表明在距離照射無1米處，要求其強度為90。

生物測試法：采用一定的菌培養(yǎng)物，經一定比例稀釋，菌量控制在200-250個/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射，2min，同時設置普通光源的對照組，后置37℃48h，計算其殺滅率。要求殺滅率達99%。

（8）顯微鏡的控制

顯微鏡應制定作業(yè)指導書，日常維護記錄及自校記錄。

顯微鏡應置于無振動，避免灰塵，防潮等要求的環(huán)境。

（9）其它微生物檢測專用儀器的控制

細菌鑒定儀、酶標儀等設備，工作中常用陽性對照檢測其功能正常性。

儀器的檢定則按有關的部門檢定或按自校作業(yè)指導書進行。

儀器的使用登記、校準計劃、校準記錄等文件存檔。

儀器專人使用、操作者應取得相應的崗位培訓合格，持證上崗。

四、培養(yǎng)基質量控制

正確進行培養(yǎng)基質量控制，并作為一項經常性的工作，建立完整的檢驗資料，是實驗室今后通過相應級別的認證，在整個檢驗質量控制體系中所必須具備的文件資料。

現(xiàn)有的依據(jù)：衛(wèi)生部1993年發(fā)布的食品檢驗用干燥培養(yǎng)基生產質量控制。但這個標準不完善。

1、常用培養(yǎng)基的質量控制

檢驗項目與方法：對新批號的干燥培養(yǎng)基物理、化學及生物學指標鑒定

A：感官（外觀）研細程度和顏色（溶解前后），透明度，雜質等；

B：PH測定，按各種培養(yǎng)基要求的PH±0.2，蒸餾水的PH應在6.4-7.0之間。

C：生物學指標檢定，被檢培養(yǎng)基相應細菌生長率測試；菌落大小及特征的檢測。

生長率測試：適用與液體和固體培養(yǎng)基：將菌培養(yǎng)液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進行平板計數(shù)或接種被檢的培養(yǎng)基試管，同時以按相關的培養(yǎng)基國標配方新鮮配制的培養(yǎng)基進行對照。不低與10%。

菌落大小測試：劃線分離測試菌，取10個菌落測量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的培養(yǎng)基無統(tǒng)計學差異。

2、常用培養(yǎng)基質量標準

外觀和理化標準：

干粉顏色：淡黃色粉末或呈現(xiàn)本培養(yǎng)基特有的顏色

溶解后培養(yǎng)基色澤：清晰透明（含瓊脂除外）淡黃色或特有的色澤；

滅菌后的培養(yǎng)基PH：7.2±2℃為多；個別弧菌檢驗用培養(yǎng)基pH值偏高為：8.0 ±2℃

生物學指標：菌落特征及菌落大小 。

3、培養(yǎng)基保存環(huán)境

制成的培養(yǎng)基保存環(huán)境為4℃冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存，干燥培養(yǎng)基干粉含有活性物質、遇熱易分解的物質應仔細查看存放條件，多數(shù)也須放在2-8 ℃條件保存。

有的培養(yǎng)基則以存放于10-15 ℃條件為易。如含有高濃度膽鹽的培養(yǎng)基。

4、培養(yǎng)基制備控制程序

培養(yǎng)基配制所用的儀器設備培養(yǎng)基配制所用的儀器設備必須經過相應的鑒定。

配制培養(yǎng)基所用的用具及容器配制培養(yǎng)基所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的，一些特殊不易洗刷清潔的玻璃器皿，必要時可用重鉻酸鉀硫酸清潔浸泡后，取出置5%氫氧化鈉溶液浸泡數(shù)分鐘，再用3%鹽酸溶液進行中和，然后用清水沖洗，烘干后備用。

5、培養(yǎng)基配制原料，試劑質量控制

配制好的培養(yǎng)基（尤其是糖發(fā)酵管）不宜久放。，因為培養(yǎng)培養(yǎng)基吸收空氣中的二氧化碳，會使培養(yǎng)基變酸，從而影響細菌的生長。

培養(yǎng)基中的抑制劑及指示劑一定要精確稱量，抑制劑要注意合理配伍。

6、培養(yǎng)基主要原料的質量控制

配制培養(yǎng)基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、膽鹽、無機鹽和瓊脂等，這些主要原料的有劣，直接影響到培養(yǎng)基的質量，由此也將影響檢驗質量。

指標有感官、理化、物理、生物學。

五、檢測質量保證

定期使用有證標準物質和次級標準物質（參考物質）進行內部質量控制。實驗室間的比對或能力驗證，利用相同或不同方法進行重復檢測，對留存的樣品進行在檢測。

微生物檢驗質控方法如下：

1、菌落計數(shù)精密度控制直接計數(shù)

選擇同一標本，要求檢驗人員進行菌落計數(shù)。

將大腸菌（25922）或經檢定標化的菌片，通過合適的梯度稀釋，選擇合適的稀釋度進行菌落計數(shù)實驗操作。36±1℃培養(yǎng)24h進行菌落計數(shù)。

菌落計數(shù)精密度控制重復計數(shù)法

2、重復計數(shù)要求

自身同一平皿重復計數(shù)誤差 小于7.7%

實驗人員之間同一平皿重復計數(shù)誤差 ±18 .2%

自身同一梯度平行加樣兩皿間相對誤 小于7.7%

實驗人員之間同一梯度計數(shù)誤差X±18 .2%范圍

不同梯度間菌落計數(shù)最終誤差 小于7.7%

3、菌種鑒定質控

菌種鑒定質控要求，對所給的微生物菌種，按有關的方法及指標進行生化、血清等方面的鑒定。

鑒定質量評價：鑒定程序是否正確；鑒定方法是否正確；具體操作技術是否熟練，結果報告是否正確。每一項設立分值為25分?？偡譃?00分。

4、內部質量控制的推薦頻率

菌落計數(shù)精密度控制： 1次/3月；

菌種鑒定控制： 1次/半年或1年

盲樣測定丟失的對照 1次/半年

六、實驗室安全防護

1、培訓與告之

實驗室管理人員及實驗人員必須了解相關工作有關的危險。對招收新職工、工作開始發(fā)生變化或使用新方法，啟用新的設備時，這點尤為重要。所有工作人員，包括清潔和服務人員都要知道。需要進行口頭和書面兩種方式的通知。有關儀器必須要有字跡清楚其安全使用的書面說明。

2、標志

在進行致病性微生物工作的房間人口處必須要有警示標志。

實驗室的房間必須以使與微生物有關的危險得以過免的方式裝置，以使微生物的傳播得到限制，房間還應便于清潔和消除污染．工作臺必須由光滑的、耐消毒劑的材料制成。難以清潔的角落、彎頭及管道應盡可能地避免污染。

3、防止空氣污染

加熱培養(yǎng)蒙或其它化學物質時，粉塵可擴做到空氣中．這可給工作人員帶來過敏反應或出現(xiàn)其它問題．因此，設計排風裝置很重要，以至包括天平附近的抽風點。通常稱量應按正確的安全規(guī)程進行。

4、有毒有害物防護

濃酸和堿及其它腐蝕性化學物質和毒性物質必須專門保存，盡可能鎖存，以使它們引起的損害減至最低．

對實驗室所用的所有化學物質，實驗室必須有記述其危險及操作中可能的限制的產品表．

在所需的范圍內工作人員必須使用人體防護裝置，防護服、手套籌．使用安全設施是實驗人員的職責污染了的防護員應盡快地更換，離開工作室時，必須脫去。

5、消除污染和廢物的處理

實驗室必須要有關于應如何消除濺出的微生物污染的書面說明。另外，對廢物的處理，如用過的培養(yǎng)皿和打碎的玻璃器皿，應有固定的程序。所有被洗的物品在洗刷前均經高壓滅菌，洗滌工受微生物感染的危險就可以盡可能避免。

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